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Linkle

13/07/2020

Como se predijo, el aumento de la señal de Rad50 SC se retrasó unos 10-15 min (Fig. 3). Para proporcionar un marco de referencia adicional, realizamos Rad52 ChIP con las elaspirador-escoba.com mismas muestras. Aquí, la señal BE aumentó primero a los 85 minutos, seguida aproximadamente 5 minutos más tarde por un aumento sustancial en la señal SC (Fig. 3).

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Tenga en cuenta que Breath of the Wild Link nació en una prominente familia de guardias reales. Pero lo hizo. «Esto nos dice que Link habla naturalmente y no está mudo, pero en la mayoría de los casos elige no hablar / es difícil para él hablar.

Por lo tanto, la invasión de la hebra en la cromátida hermana parece ocurrir muy rápidamente después de que Rad52 se une por primera vez al seDSB resecado, y ocurre aproximadamente 15 minutos después de que MRN se une por primera vez al seDSB. Las interacciones Rad50 y Rad52 SC ocurren aproximadamente al mismo tiempo, aunque solo a partir de estos datos, no podemos concluir si son concurrentes. En cualquier caso, las interacciones secuenciales de Rad50 con el ADN de BE y SC son consistentes con las interacciones de SC de coordinación de MRN durante la reparación de SCR.

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El crecimiento mejorado de las cepas h90 frente a mat2,3∆ en el fondo rad50∆ pku80∆ indica que la presencia de la plantilla de reparación intracromosómica en las células h90 alivia parcialmente el requisito de que Rad50 repare el mat1 seDSB. Los modelos de anclaje predicen la unión secuencial de unporque.com MRN al seDSB y la cromátida hermana. Para probar esta predicción, repetimos el experimento de ChIP del ciclo celular tomando muestras a intervalos de 5 minutos. La señal Rad50 BE aumentó de manera constante en el período de 70 a 90 minutos después de la liberación de la detención G2 (Fig. 3).

  • Las células mutantes ctf7-203 y mcd1-1 mostraron ambas una viabilidad disminuida cuando se permitió que las células sincronizadas avanzaran desde G1 hasta la mitosis a 37ºC.
  • Por tanto, no se requiere Ctf7p durante la mitosis cuando se mantiene la cohesión de las cromátidas hermanas.
  • Por el contrario, las células ctf7-203 conservaron una alta viabilidad incluso después de 3 horas de incubación a 37 ° C.
  • La combinación de estos resultados sugiere que Ctf7p juega un papel en la cohesión distinto de Mcd1p.

A la temperatura restrictiva, las cepas mutantes de ctf7 perdieron rápidamente la viabilidad en comparación con el tipo salvaje, lo que indica que los tres alelos causaron un defecto irreversible (Fig. B). La provisión de una plantilla de reparación intracromosómica suprime parcialmente el defecto de reparación mat1 seDSB en células rad50∆ pku80∆. Se obtuvieron colonias de los genotipos indicados mediante disección oraciones-poderosass.com de tétrada de rad50∆ pku80∆ h− cruzada con células h90 o mat2,3∆. El tamaño de la colonia se midió y se normalizó a WT h− como se describe en Materiales y métodos. El crecimiento igual de las cepas h90 y mat2,3∆ en el fondo de pku80∆ indica que la reparación de SDSA intracromosómica y la reparación de SCR intercromosómica (mat2,3 of) de la horquilla colapsada mat1 son igualmente eficaces en ausencia de Ku.

Aryll

Ensayos de ChIP Rad50 con seDSB y cromátida hermana ininterrumpida en una horquilla de replicación colapsada. Diagrama del locus mat1 que muestra el sitio del colapso de la horquilla y las ubicaciones de los productos de PCR utilizados para los ensayos de ChIP. Rad52 ChIP enriquece el sitio mat1 seDSB y la región SC, mientras que Ku ChIP solo enriquece la región BE. Los ensayos se realizaron con Rad52-5FLAG o pKu70-3HA expresados ​​a partir de sus loci endógenos en fondos mat2,3∆.

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